BL21(DE3)/pLysS感受态细胞适用于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。

注：本产品为定制产品，如需购买请联系我们。

■ 产品简介

BL21(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性，可以表达能抑制T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶(T7 lysozyme)，从而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG诱导前的本底表达，即导致本底性的外源重组蛋白的表达被有效抑制，但不干扰IPTG诱导的表达。这种情况下特别适合于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。此外，T7溶菌酶还可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖导致大肠杆菌溶解。该菌株染色体整合了λ(DE3)序列，在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导该菌株中T7 RNA聚合酶的高表达，因此BL21(DE3) pLysS菌株适合T7启动子驱动的重组蛋白诱导表达系统，比如常见的原核表达载体pET系列。该感受态细胞经pUC19质粒检测，其转化效率高达107 cfu/μg DNA。

■ 产品优势

● 高转化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
● 专门构建用于高水平重组蛋白表达
● 能降低外源重组蛋白的本底表达

■ 产品组成

基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLysS (CamR)

■ 保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存!

■ 产品应用

BL21(DE3)/pLysS感受态细胞适用于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。

■ 使用方法

1. 解冻感受态细胞：从-80 ℃取出感受态细胞，冰上融化约5-10 min，然后立即进行DNA样品的转化。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态可加入0.5-10 μL待转化DNA样品（例如质粒、连接产物或重组产物等），然后轻轻弹击管底约5-6次，立即冰上静置孵育30 min。

• 待转化DNA样品的加入体积不宜超过感受态细胞体积的1/10。

• 加入待转化DNA样品后应轻柔弹击混匀，避免使用移液枪剧烈吹打混匀。

• 用于质粒的转化时可将冰浴时间缩短至5-10 min；用于连接产物或重组产物转化时，建议冰浴时间为15-30 min以提高转化效率。

3. 热激处理：冰浴后，将装有感受态和DNA样品的的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰上静置2-3 min以快速冷却。

• 热激时间需要精确控制在45-90 s。

• 热激及转移至冰浴过程中禁止晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 室温或37 ℃预热的LB培养基（或SOC培养基等），上下颠倒数次混匀，然后将离心管倾斜放置在恒温摇床中，37℃ 220 rpm复苏培养45 min。

• 37℃为常规复苏温度，若转入质粒对温度敏感或其它特殊情况需根据实验要求设置合适的温度。

5. 收菌涂板：用于质粒转化时，复苏后可直接取50-100 μL菌液涂板；用于连接产物或重组产物转化时，建议先5000 g，1 min室温离心，吸弃约900 μL上清，然后用剩余的约100 μL重悬菌液，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

• 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

• 37℃为常规培养温度，若转入质粒对温度敏感或其它特殊情况需根据实验要求设置合适的温度。

■ 相关参数