T7 Express LysY/Iq感受态细胞可用于克隆潜在毒性基因或表达毒性基因。

注：本产品为定制产品，如需购买请联系我们。

■ 产品简介

T7 Express LysY/Iq是BL21菌株的衍生菌株，广泛用于蛋白的原核表达实验。T7 Express lysY/Iq菌株中的T7 RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域(基因组中无λ前噬菌体序列)可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Lon 和OmpT蛋白酶缺陷可促进表达蛋白的稳定。fhuA2突变赋予T7 Express lysY/Iq菌株对噬菌体T1的抗性。LysY质粒(携带氯霉素抗性)是T7溶菌酶的一个变体，缺乏任何酰胺酶活性，因此细胞在诱导过程中对裂解不太敏感。而且T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，同时不干扰IPTG诱导的表达。不限制甲基化DNA(McrA-、McrBC-、EcoBr-m-、Mrr-)。LysY溶菌酶/lacIq质粒的维持不需要抗生素选择。总的来说，lacIq对表达的严格控制允许克隆潜在毒性基因，T7溶菌酶控制T7 RNA聚合酶可以表达毒性基因。经pUC19质粒转化检测，T7 Express LysY/Iq感受态细胞的转化效率可达108 cfu/μg DNA。

■ 产品优势

● 高转化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
● 可用于克隆潜在毒性基因或表达毒性基因

■ 产品组成

基因型：MiniF lysY lacIq (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS )2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS ) endA1 Δ(mcrC-mrr) 114::IS10 

■ 存储条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存!

■ 产品应用

T7 Express LysY/Iq感受态细胞可用于克隆潜在毒性基因或表达毒性基因。

■ 使用方法

1. 解冻感受态细胞：从-80 ℃取出感受态细胞，冰上融化约5-10 min，然后立即进行DNA样品的转化。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态可加入0.5-10 μL待转化DNA样品（例如质粒、连接产物或重组产物等），然后轻轻弹击管底约5-6次，立即冰上静置孵育30 min。

• 待转化DNA样品的加入体积不宜超过感受态细胞体积的1/10。

• 加入待转化DNA样品后应轻柔弹击混匀，避免使用移液枪剧烈吹打混匀。

• 用于质粒的转化时可将冰浴时间缩短至5-10 min；用于连接产物或重组产物转化时，建议冰浴时间为15-30 min以提高转化效率。

3. 热激处理：冰浴后，将装有感受态和DNA样品的的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰上静置2-3 min以快速冷却。

• 热激时间需要精确控制在45-90 s。

• 热激及转移至冰浴过程中禁止晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 室温或37 ℃预热的LB培养基（或SOC培养基等），上下颠倒数次混匀，然后将离心管倾斜放置在恒温摇床中，37℃ 220 rpm复苏培养45 min。

• 37℃为常规复苏温度，若转入质粒对温度敏感或其它特殊情况需根据实验要求设置合适的温度。

5. 收菌涂板：用于质粒转化时，复苏后可直接取50-100 μL菌液涂板；用于连接产物或重组产物转化时，建议先5000 g，1 min室温离心，吸弃约900 μL上清，然后用剩余的约100 μL重悬菌液，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

• 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

• 37℃为常规培养温度，若转入质粒对温度敏感或其它特殊情况需根据实验要求设置合适的温度。

■ 相关参数